產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是來(lái)源于灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一種核苷類(lèi)抗生素，中文名為滅瘟素S、殺稻瘟菌素S或稻瘟散，一般為鹽酸鹽。

Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是來(lái)源于灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一種核苷類(lèi)抗生素，中文名為滅瘟素S、殺稻瘟菌素S或稻瘟散，一般為鹽酸鹽。

Blasticidin S常用于篩選攜帶bsr/BSD/bls基因(常標(biāo)記為bsrr/bsdr/Blastr)質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，具有快速而強(qiáng)效的作用模式，很低的抗生素濃度便能使未攜帶抗性基因的細(xì)胞迅速死亡。

本產(chǎn)品10mg/ml包裝配制在HEPES (pH7.4)緩沖溶液中，濃度為10mg/ml，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，可以直接用于細(xì)胞培養(yǎng)。本產(chǎn)品10mg和50mg包裝為粉末裝。

Blasticidin S通過(guò)干擾核糖體結(jié)合肽段而特異性抑制原核細(xì)胞或真核細(xì)胞的蛋白合成。目前已經(jīng)有3種滅瘟素耐受基因，一種是分離自鏈霉菌(Streptoverticillum sp.)的乙?；D(zhuǎn)移酶基因bls；另外兩種是脫氨酶基因，分別是從蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)中分離的bsr和從土霉菌(Aspergillus terreus)中分離的BSD基因。bsr和BSD基因是zui常用的篩選標(biāo)志，用于哺乳動(dòng)物和植物細(xì)胞的穩(wěn)定細(xì)胞株篩選。Blasticidin S也可用于大腸桿菌(E. coli)等原核細(xì)胞的篩選。

Blasticidin S具有快速而強(qiáng)效的作用模式，在很低的抗生素濃度下便能導(dǎo)致細(xì)胞快速死亡。大腸桿菌通常對(duì)50μg/ml的濃度敏感，而哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì)低至2-10µg/ml的濃度敏感。細(xì)胞死亡迅速發(fā)生，通?？稍诓坏揭恢艿臅r(shí)間內(nèi)即可形成具有Blasticidin S抗性的穩(wěn)定哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。

訂購(gòu)信息

常溫運(yùn)輸。4℃保存，有效期36個(gè)月。

技術(shù)參數(shù)

1.CAS：3513-03-9

2.分子式：C17H26N8O5·HCl

3.分子量：458.9

4.純度：>95%

5.結(jié)構(gòu)式：

使用方法

1.推薦工作濃度

推薦的作用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的Blasticidin S濃度一般為1-50μg/ml，但最佳工作濃度需要通過(guò)劑量反應(yīng)曲線(xiàn)來(lái)確定。

表1.部分常見(jiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的推薦工作濃度表

2.Blasticidin S劑量反應(yīng)曲線(xiàn)的確定
　　Blasticidin S的有效篩選濃度與細(xì)胞類(lèi)型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝及細(xì)胞所處細(xì)胞周期等因素相關(guān)。為了篩選到具有Blasticidin S抗性的穩(wěn)定細(xì)胞株，需要確定殺死未轉(zhuǎn)染/感染宿主細(xì)胞所需的Blasticidin S的zui低濃度，可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定適合自身實(shí)驗(yàn)體系的劑量反應(yīng)曲線(xiàn)(dose-response curve or kill curve)。
（1）第一天：將正常的細(xì)胞按照約25%的密度接種在適宜的細(xì)胞培養(yǎng)板上，于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)夜。
（2）第二天：將培養(yǎng)過(guò)夜的細(xì)胞培養(yǎng)基換成新鮮的含不同濃度Blasticidin S的篩選用培養(yǎng)基，Blasticidin S濃度可以設(shè)置為0、2、4、6、8和10μg/ml等，每個(gè)濃度設(shè)置2個(gè)復(fù)孔，于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。注：也可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)體系，設(shè)置不同的濃度梯度。
（3）每3-4 d更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀(guān)察存活細(xì)胞的比例。
（4）選擇在加入Blasticidin S后7-10天殺死大多數(shù)細(xì)胞的zui低濃度為最佳篩選濃度。
3.哺乳動(dòng)物穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選
　　轉(zhuǎn)染含有bsr或BSD基因的質(zhì)?；蛘吒腥竞性摶虻牟《竞螅纯珊Y選穩(wěn)定表達(dá)株。
（1）細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染48h后，將細(xì)胞置于含有適當(dāng)濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此為處理組。
【注】：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用zui明顯。細(xì)胞過(guò)于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降，所以細(xì)胞的密度最好不超過(guò)25%。建議同時(shí)做一個(gè)正常細(xì)胞的對(duì)照組。轉(zhuǎn)染或感染48 h后，如果細(xì)胞過(guò)密也可以消化后重新接種細(xì)胞，培養(yǎng)過(guò)夜后即可進(jìn)行Blasticidin S篩選。
（2）每3-4 d去除培養(yǎng)基，加入含Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基。

（3）篩選7-10 d后，對(duì)照組正常細(xì)胞應(yīng)該100%死亡，處理組中存活的細(xì)胞為表達(dá)bsr或BSD基因的細(xì)胞。然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行多克隆或單克隆細(xì)胞的篩選。根據(jù)宿主細(xì)胞種類(lèi)和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要一周或更多的時(shí)間。
（4）克隆形成后，挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆到35mm細(xì)胞培養(yǎng)板中，加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7 d。隨后用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域

2.用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，溶解后，須用一次性針頭濾器過(guò)濾除菌。

3.抗生素不穩(wěn)定，請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)盡快使用。

4.以上數(shù)據(jù)均來(lái)自公開(kāi)文獻(xiàn), 李記生物暫未本產(chǎn)品進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證, 僅供參考。

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