線粒體染色試劑盒的固定和透化，染色結(jié)束后，利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細(xì)胞。小心吸走清洗液，換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞固定。清洗細(xì)胞：吸除固定液，用適當(dāng)緩沖液沖洗細(xì)胞數(shù)次。細(xì)胞透化（可選）可將已固定的細(xì)胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育。透化結(jié)束后，用緩沖液清洗細(xì)胞即可進(jìn)行后續(xù)ICC實(shí)驗(yàn)。一般用含0.2% Triton X-100的PBS孵育細(xì)胞10分鐘可以達(dá)到良好的透化效果。還可利用預(yù)冷的丙酮透化5 分鐘，之后用PBS清洗細(xì)胞。經(jīng)驗(yàn)證，即使后繼沒有進(jìn)一步的抗體標(biāo)記，丙酮透化處理也可降低背景信號。
細(xì)胞染色，對于貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)皿/培養(yǎng)板準(zhǔn)備細(xì)胞樣本。待細(xì)胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預(yù)熱的含探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育15分鐘～45分鐘（具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定，需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化）也可以將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長，利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液。若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時(shí)間。熒光顯微鏡（含合適濾片）或流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀下觀察。zui大激發(fā)/發(fā)射波長為579 / 599nm。或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟，對于懸浮細(xì)胞，離心，吸除上清。利用37℃預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞，于生長狀態(tài)下孵育30分鐘～2小時(shí)（具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定，需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。置于熒光鏡下觀察?；蛄魇郊?xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀檢測。zui大激發(fā)/發(fā)射波長為579 / 599nm?；蛘哌M(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟。
線粒體染色試劑盒是一種雙膜結(jié)合的細(xì)胞器，存在于大多數(shù)真核細(xì)胞中。線粒體的功能是提供細(xì)胞能量。此外，線粒體參與其他任務(wù)，如信號傳遞、細(xì)胞分化和細(xì)胞死亡，以及維持對細(xì)胞周期和細(xì)胞生長的控制。線粒體與多種人類疾病有牽連，包括線粒體疾病、心臟疾病、心力衰竭和孤獨(dú)癥。線粒體可能在這些細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用。
更新時(shí)間：2018-12-22
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