線粒體染色試劑盒的相關(guān)知識(shí)普及

    以細(xì)胞質(zhì)染色呈棕黃色或黃色為陽(yáng)性，染色結(jié)果采用Image-pro6.0圖像分析軟件進(jìn)行分析，高倍鏡(×400)下每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，測(cè)定吸光度值(A值)并取其平均值作為該切片的A值。Omi/HtrA2的胞內(nèi)轉(zhuǎn)位間接免疫熒光雙染色法，在激光共聚集顯微鏡下觀察。取制備好的10μm厚的冷凍切片，采用免疫組織化學(xué)法，嚴(yán)格按免疫組織化學(xué)試劑盒和線粒體染色試劑盒說明書操作。線粒體的染色為綠色熒光,Omi/HtrA2的染色為紅色熒光,分別用綠色及紅色通道掃描，后合成。以胞質(zhì)中線粒體綠色熒光與Omi/HtrA2紅色熒光重疊合成黃色為陰性細(xì)胞,代表Omi/HtrA2尚未發(fā)生胞內(nèi)轉(zhuǎn)位。反之，胞質(zhì)中紅色熒光與綠色熒光未發(fā)生重疊而相互分離為陽(yáng)性細(xì)胞,代表Omi/HtrA2已經(jīng)發(fā)生胞內(nèi)轉(zhuǎn)位,隨機(jī)取多個(gè)視野計(jì)數(shù)共200個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞,以其比例做統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0軟件對(duì)其行單因素方差分析,結(jié)果用x珋±s表示,組間比較采用LSD法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1肺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化對(duì)照組早產(chǎn)鼠1 d、3 d、7 d肺組織未見病理改變,肺泡結(jié)構(gòu)逐漸發(fā)育成熟。高氧組早產(chǎn)鼠高氧暴露1 d時(shí),與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高氧暴露3 d時(shí),逐漸出現(xiàn)肺泡壁毛細(xì)血管充血擴(kuò)張,肺泡腔及間質(zhì)內(nèi)有少量炎性滲出，高氧暴露7d時(shí)，肺損傷較嚴(yán)重，肺泡腔和間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔增厚，肺泡數(shù)目減少，且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單化和囊泡化，間質(zhì)內(nèi)膠原樣物質(zhì)增生，部分肺組織可見肺泡萎縮和肺不張。與高氧組相比，二氮嗪組肺組織受損得到改善。