高保真DNA聚合酶具有廣泛的模板適應(yīng)性，優(yōu)化的緩沖體系廣泛適用于各種類(lèi)型模板，便于快速得到理想的擴(kuò)增結(jié)果，提供PCR Enhancer以幫助擴(kuò)增高GC含量的模板，提供即用型的預(yù)混液，zui大程度地減少實(shí)驗(yàn)步驟。
高保真DNA聚合酶真性的一個(gè)通用標(biāo)準(zhǔn)是錯(cuò)配率，錯(cuò)配率越低保真性越好，普通Taq酶的錯(cuò)配率在10-5堿基/循環(huán)數(shù)，而高保真Taq酶錯(cuò)配率可降到10-6數(shù)量級(jí)，大大降低了出錯(cuò)的可能性；它適合對(duì)PCR保真性要求較高的實(shí)驗(yàn)，如基因篩選、測(cè)序、突變檢測(cè)等。
高保真DNA聚合酶理化性質(zhì)，純化的DNApolⅠ由一條多肽鏈組成，約含1000個(gè)氨基酸殘基，MW為109KD。分子含有一個(gè)二硫鍵和一個(gè)-SH基。通過(guò)二個(gè)酶分子上的-SH基與Hg2+結(jié)合產(chǎn)生二聚體，仍有活性。每個(gè)酶分子中含有一個(gè)Zn2+，在DNA聚合反應(yīng)起著很重要的作用。每個(gè)大腸桿菌細(xì)胞中含有約400個(gè)分子，每個(gè)分子每分鐘在37℃下能催化667個(gè)核苷酸摻入正在生長(zhǎng)的DNA鏈。經(jīng)過(guò)枯草桿菌蛋白酶處理后，酶分子分裂成兩個(gè)片段，大片段分子量為76KD，通常稱(chēng)為Klenow片段，小片段的分子量為34KD。此酶的模板專(zhuān)一性和底物專(zhuān)一性均較差，它可以用人工合成的RNA作為模板，也可以用核苷酸為底物。在無(wú)模板和引物時(shí)還可以從頭合成同聚物或異聚物。
高保真DNA聚合酶保真原理是，高保真Taq酶具有3到5核酸外切酶的活性，PCR擴(kuò)增途中如果產(chǎn)生了錯(cuò)配的堿基，它可以將其切掉，從而保證了擴(kuò)增的準(zhǔn)確性；需要提醒的是由于此酶具有核酸外切酶功能，往往擴(kuò)增效率低一些，有的還會(huì)降解引物，而且產(chǎn)物一般不宜用TA或UA克隆法克隆。高保真DNA聚合酶的外切活性會(huì)導(dǎo)致PCR反應(yīng)之后不會(huì)加尾，所以如果要進(jìn)行TA克隆，要先進(jìn)行PCR產(chǎn)物回收（否則影響加尾），然后回收產(chǎn)物用普通Taq酶72度保溫一段時(shí)間，從而利用普通Taq酶加尾的活性。具有zui高的保真度和zui強(qiáng)的擴(kuò)增能力，高保真DNA Polymerase，其保真度是Taq DNA Polymerase的52倍，是Pfu DNA Polymerase的6倍，擴(kuò)增速度是常規(guī)聚合酶的4-150倍。
更新時(shí)間：2018-05-09
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