Smart Cell 線粒體染色試劑盒NIR使用說(shuō)明書

SmartCell 線粒體染色試劑盒NIR(同Mitotracker NIR)

產(chǎn)品描述

線粒體(mitochondrion)是一種存在于大多數(shù)真核細(xì)胞中的兩層膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器，是細(xì)胞中的“能量工廠”(cellular power plants)",生產(chǎn)了細(xì)胞所需的大部分ATP，除了為細(xì)胞提供能量外，還涉及諸如細(xì)胞分化、細(xì)胞信息傳遞和細(xì)胞凋亡等過(guò)程，并擁有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞周期的能力。已有文獻(xiàn)報(bào)道，線粒體還與線粒體失調(diào)癥、心臟功能障礙、衰老等人類疾病有關(guān)。盡管大部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)DNA在細(xì)胞核內(nèi)，但線粒體擁有獨(dú)立的基因組，呈現(xiàn)母性遺傳。基于以上特點(diǎn)，線粒體是生物、生命科技領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

Smart Cell染色試劑盒是Life-iLab公司專門研發(fā)的一類熒光成像工具，試劑盒設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)，需人為手動(dòng)操作的步驟很少。可用來(lái)標(biāo)記細(xì)胞器、亞細(xì)胞等結(jié)構(gòu)，例如細(xì)胞膜、線粒體、線粒體和細(xì)胞核等。

       Smart Cell線粒體染色試劑盒可以標(biāo)記活細(xì)胞中的線粒體，使之帶紅色熒光(Ex/Em =640/659nm)(Cy5 filter) 。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物，屬線粒體選擇性染料，該染料能輕易進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)線粒體膜電位變化滲透進(jìn)入線粒體，并在線粒體中富集。Smart Cell線粒體染色試劑盒提供了標(biāo)記線粒體的全套試劑，能提供藍(lán)色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇，既可單獨(dú)使用，也支持對(duì)細(xì)胞的多重?zé)晒夥治?/span>。這種的細(xì)胞標(biāo)簽為從空間上和時(shí)間上研究發(fā)生的細(xì)胞活動(dòng)提供了一種十分有效的方法。

試劑盒組分

使用方法 

 1. 準(zhǔn)備線粒體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘，預(yù)熱MitoView NIR染料(Component A)。 

1.2 取20µL預(yù)熱好的MitoView NIR染料(Component A)，用10 mL活細(xì)胞染色緩沖液(Component B)進(jìn)行稀釋。 

注意：1) 20μL MitoView NIR染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實(shí)驗(yàn)，剩余的MitoView NIR染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。2)*染料濃度根據(jù)具體應(yīng)用會(huì)有不同，染色條件根據(jù)細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的染料滲透性不同可以進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化。

2. 細(xì)胞染色 

2.1 貼壁細(xì)胞：在96孔板（100μL）或培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到70-80%融合度，在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時(shí)。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長(zhǎng)培養(yǎng)基按1:1)替換色染液。同TRITC設(shè)置在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察。

注意：如果細(xì)胞沒(méi)有充分染色，可以適當(dāng)增加染料濃度或增加染色時(shí)間進(jìn)行改善

2.2 懸浮細(xì)胞: 在1000 rpm 條件下離心細(xì)胞培養(yǎng)液5分鐘，棄去上清，用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)液溫和的重懸細(xì)胞，然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2)，在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞30分鐘-2小時(shí)。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長(zhǎng)培養(yǎng)基按1:1)替換色染液。同Cy5 設(shè)置在顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察。

圖1：HeLa 細(xì)胞用SmartCell線粒體染色試劑盒NIR染色后進(jìn)行成像分析

（所用96孔板為Costar black）