PikoGreen dsDNA定量試劑盒 使用說明書

PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)

產(chǎn)品描述

PikoGreen是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料，于雙鏈DNA的定量。測定DNA濃度在cDNA文庫構(gòu)建、DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物估測等領(lǐng)域中非常重要，另外疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測因關(guān)系人身健康，顯得尤為重要。

相比傳統(tǒng)的方法，Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢：①靈敏：數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感，可節(jié)省樣品；②特異性強(qiáng)：只結(jié)合dsDNA，特異性強(qiáng)，不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA，蛋白，RNA等影響；③耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、CHCl?、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA。④線性范圍寬：PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度，在100pg/ml-100ng/ml范圍內(nèi)呈良好線性；熒光計(jì)兼容。⑤容易使用：在樣品中加入染料，等待5-6分鐘染色，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和可適用于各種DNA樣品分析，PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

PikoGreen僅與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。該分析在四個(gè)數(shù)量級范圍內(nèi)呈線性，且?guī)缀鯚o序列依賴性，可以地測量多個(gè)來源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。該方法因其穩(wěn)定性、靈敏性，已經(jīng)錄入《中國藥典》。

PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)（兼容Qubit 3.0）是李記生物研發(fā)的dsDNA定量試劑盒，具有線性dsDNA特異性好、線性范圍寬、操作簡便等特點(diǎn)。

產(chǎn)品組分

PikoGreen dsDNA 定量試劑盒組份（1000 assay）

              A：1×定量緩沖液      250 mL

              B：100×反應(yīng)液         5 mL

              C：100×反應(yīng)增強(qiáng)液   5 mL

              D：dsDNA 標(biāo)準(zhǔn)品    9 x 0.5 mL（0 , 2, 6.25, 12.5 , 25, 50 , 100, 150 and 200 ng/uL）

技術(shù)資料

1. Ex(nm)：350

2. Em(nm)：460

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。收到貨后-4℃避光干燥保存。如果較長時(shí)間不用，建議把TE緩沖液及dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品放置于-20℃保存。

使用方法：（以96孔板為例）

1．使用前，將產(chǎn)品從儲(chǔ)存條件下取出恢復(fù)至室溫。PikoGreen提供的是DMSO溶液，在4℃存放時(shí)成固體，可37℃水浴溶解。每個(gè)組分應(yīng)充分震蕩或渦旋混勻、離心，以免造成不必要的試劑損耗。

2．配制PikoGreen工作液，分別吸取20ml組分A, 200uL組分B, 200uL組分C配制成20ml 1 x Piko Green工作液。新配工作液應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)使用，工作液重新存放使用時(shí)須重懸，以免染料沉淀，工作液存放24小時(shí)，會(huì)輕微影響定量結(jié)果。

3．每個(gè)樣品，吸取200uL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結(jié)果可靠，建議每個(gè)測試樣品和DNA標(biāo)樣分別做平行的3個(gè)復(fù)孔。黑色的檢測板可以減少各測試樣品間的熒光干擾。

4．96孔板微孔中，分別加入dsDNA標(biāo)樣或待測樣品各10 uL，并用移液器輕輕混勻。

5．將微孔板室溫避光孵育10分鐘，在Ex(nm)：350,  Em(nm)：460處用酶標(biāo)儀測量熒光值。

6．制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品濃度。

注意：

1．為了得到*結(jié)果，請使用校準(zhǔn)的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測板。

2．建議檢測時(shí)每個(gè)DNA標(biāo)樣和未知樣品都設(shè)定3個(gè)復(fù)孔。如果檢測時(shí)不只一塊96孔板，建議每塊96孔板都設(shè)定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量減少檢測板之間的誤差。

3．為得到*結(jié)果，檢測板應(yīng)在一小時(shí)內(nèi)讀取完畢。如果將反應(yīng)液重新儲(chǔ)存并在24小時(shí)內(nèi)讀取數(shù)據(jù)，結(jié)果的性會(huì)有輕微損失。