RIPA裂解液介紹與如何選擇

提到蛋白提取，大家不約而同會(huì)想到RIPA裂解液，裂解液加入樣品中，離心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我們真的用對(duì)了嗎？RIPA裂解液是從動(dòng)物細(xì)胞或組織中提取蛋白的常用裂解液，其工作原理是利用去污劑（表面活性劑）裂解細(xì)胞膜和核膜，從而獲取細(xì)胞和組織中的RIPA可溶性蛋白。

RIPA裂解液的選擇

RIPA裂解液中主要包含去污劑，緩沖體系，等滲體系，變性劑、穩(wěn)定劑等。其中去污劑是細(xì)胞裂解液中重要成分，是由疏水尾端基團(tuán)和極性親水頭端基團(tuán)組成的兩性分子，它們能夠降低水的表面張力，所以也被稱為表面活性劑，起到破壞脂質(zhì)雙分子層、破裂細(xì)胞以及溶解蛋白等作用。

去污劑的類型

不同類型的去污劑對(duì)樣品的裂解效率有所不同，RIPA裂解液有多種配方，通常會(huì)使用不同類型的去污劑組合和不同的去污劑濃度，故不同配方的RIPA裂解液能溶解出的蛋白量和蛋白種類會(huì)有較大差異，獲得的蛋白圖譜會(huì)有所不同，從而導(dǎo)致后續(xù)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果也會(huì)產(chǎn)生差異結(jié)果。需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品和下游實(shí)驗(yàn)嘗試選擇合適的RIPA裂解液配方。

使用ripa裂解液的注意事項(xiàng)

 • 由于多數(shù)RIPA裂解液裂解強(qiáng)度較為溫和，對(duì)胞質(zhì)中的可溶性蛋白和部分高表達(dá)于細(xì)胞膜、細(xì)胞核上的蛋白提取較為有效，故RIPA裂解液適于這類蛋白的提取，推薦用于WB實(shí)驗(yàn)中的定性檢測(cè)。

 • RIPA裂解液提取蛋白時(shí)，經(jīng)離心后會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)組分即RIPA可溶組分（上清）和RIPA不可溶組分（白色沉淀），屬正常情況。盡量避開(kāi)沉淀吸取上清用于下游實(shí)驗(yàn)。

 • 如樣品加入RIPA裂解液后出現(xiàn)較為黏稠狀態(tài)，說(shuō)明樣品裂解過(guò)于充分，無(wú)法去除核酸殘團(tuán)的情況下，需要使用強(qiáng)度更低的裂解液配方，增加超聲處理或更換總蛋白提取試劑盒（李記生物Cat：AP01L204），柱式法可以利用離心柱將核酸殘團(tuán)進(jìn)行截留解決樣品黏稠問(wèn)題，無(wú)不可溶組分，可獲得更完整的蛋白圖譜。

 • 使用RIPA裂解液提取組織樣品時(shí)，由于組織樣品差異較大，從不同樣品中高效提取組織蛋白具有挑戰(zhàn)性，例如纖維組織和膠原組織（如心臟和腎臟）和軟組織（如脾臟和肝臟）需要采用不同的研磨方案匹配，才能獲得較佳結(jié)果。

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