分析影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素

　　細胞轉(zhuǎn)染指的是將外源分子如DNA、RNA等導(dǎo)入到真核細胞內(nèi)部的技術(shù)。隨著基因和蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為科研實驗中常用的技術(shù)手段之一。對于細胞轉(zhuǎn)染實驗，轉(zhuǎn)染試劑、轉(zhuǎn)染方法、細胞狀態(tài)等都會影響到細胞轉(zhuǎn)染的效率，本文主要對影響細胞轉(zhuǎn)染效率的8個因素做一介紹。

　　1.轉(zhuǎn)染試劑

　　瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可以選擇不同的轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染試劑的選擇又可以根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的文獻，已經(jīng)有很多細胞株被成功轉(zhuǎn)染，通過文獻資料可以參考最適的轉(zhuǎn)染試劑，當(dāng)然也要根據(jù)不同的實驗需求選擇。一般來說轉(zhuǎn)染試劑的要求是低毒，高效，廉價易得。

　　2.轉(zhuǎn)染方法

　　現(xiàn)在有多種方式能夠?qū)崿F(xiàn)細胞轉(zhuǎn)染，如磷酸鈣法，電穿孔法，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、逆轉(zhuǎn)錄病毒法等等（更多細胞轉(zhuǎn)染方法）。不同的轉(zhuǎn)染方式其轉(zhuǎn)染效率也不盡相同需要根據(jù)細胞的性質(zhì)及不同的操作手法，摸索最佳的轉(zhuǎn)染條件。

　　3.細胞狀態(tài)

　　一般傳代數(shù)小于50代以下的細胞即能保證基因型不變。瞬時轉(zhuǎn)染最合適的細胞是達到對數(shù)生長期的細胞，此時細胞生長旺盛，最容易被轉(zhuǎn)染。同一種系的細胞株，在不同實驗室不同培養(yǎng)條件下，其生物學(xué)性狀都會產(chǎn)生不同改變，從而導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。因此，針對這種轉(zhuǎn)染效率降低的情況，應(yīng)轉(zhuǎn)用新鮮培養(yǎng)的細胞轉(zhuǎn)染達到好的結(jié)果。

　　4.載體構(gòu)建

　　基因產(chǎn)物對細胞不能有毒害作用，瞬時轉(zhuǎn)染難以進行。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建選擇可調(diào)控，強度合適的啟動子很重要，可以做空載體或相同載體的其他基因為對照排除毒性對細胞的影響。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞。

　　5.細胞培養(yǎng)基

　　培養(yǎng)基是瞬時轉(zhuǎn)染的最基本要素。不同細胞選擇不同的培養(yǎng)基，血清和其他添加物。使用的轉(zhuǎn)染試劑要參考其說明書。培養(yǎng)物一定要避免細菌，支原體真菌的污染。

　　6.血清

　　血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的成分不明確添加物，對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響細胞生長，因此也會影響細胞轉(zhuǎn)染效率，不同批次購買的血清質(zhì)量也會存在差別。對于傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法要求在無血清培養(yǎng)基條件下轉(zhuǎn)染，血清被認為會降低瞬時轉(zhuǎn)染的效率。針對現(xiàn)有人們常用的的轉(zhuǎn)染試劑來說，血清的存在已不會影響轉(zhuǎn)染效率，甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率。在轉(zhuǎn)染過程中*可以使用血清，針對RNA轉(zhuǎn)染，消除血清中潛在的核糖核酸酶污染要格外關(guān)注。且血清比較珍貴，胎牛血清，馬或牛血清都常被用到，價格也不盡相同，根據(jù)自身選擇。

　　7.細胞密度

　　細胞密度對轉(zhuǎn)染效率也有一定影響，一般轉(zhuǎn)染時貼壁細胞密度為50-90%，具體要根據(jù)選用的轉(zhuǎn)染試劑的說明書。不同的轉(zhuǎn)染試劑最適的細胞密度各不相同，即使同一種試劑，也會因不同的細胞類型或應(yīng)用而異。

　　例如陽離子脂質(zhì)體具有微量的細胞毒性而要更高的細胞鋪板密度或更多的懸浮細胞數(shù)，盡量在細胞最適的生理狀態(tài)下轉(zhuǎn)染，以求最佳的轉(zhuǎn)染效果。

　　8.DNA質(zhì)量

　　針對一般常用的轉(zhuǎn)染技術(shù)都是基于電荷吸引的原理轉(zhuǎn)染的，如果DNA的純度不高，存在其他雜質(zhì)，如鹽離子等都會影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成。針對市面上現(xiàn)有的超純質(zhì)粒抽提的試劑盒，能達到非常高的純度效果，從而可以避免DNA純度的影響。