核酸純化的方法及原理

　　核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗(yàn)的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
 

　　核酸純化的方法及原理如下：
 

　　一、PC抽提法
 

　　PC 抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會(huì)被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會(huì)損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組 DNA 會(huì)斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC 抽提的另外一個(gè)用途是，利用酸性酚可以部分去除 DNA 的特點(diǎn)，在 RNA 抽提時(shí)獲得 DNA 殘留極少的 RNA。不過有一點(diǎn)要提醒的是，某些植物樣品，在去除某些雜質(zhì)之前，是不能使用 PC 抽提的，否則核酸必定降解。PC抽提最大的優(yōu)勢是成本低廉，對實(shí)驗(yàn)條件要求較低，對于經(jīng)費(fèi)緊張的實(shí)驗(yàn)室較為實(shí)用。
 

　　二、高鹽沉淀法
 

　　高鹽沉淀蛋白質(zhì)/醇沉淀方法，同樣也是一個(gè)非常不錯(cuò)的方法。與 PC 抽提方法相比，除了純度的穩(wěn)定性可能要低一點(diǎn)外，該方法幾乎克服了 PC 抽提的所有缺點(diǎn)。更快、更輕松的去除蛋白質(zhì)所可以用于大規(guī)模抽提，但其不足之處是純度 (蛋白質(zhì)殘留) 不夠穩(wěn)定，蛋白質(zhì)的沉淀效率在4℃會(huì)更好一些。
 

　　三、離心柱法
 

　　離心柱純化法，是目前試劑盒提取廣泛應(yīng)用的方法。其最大特點(diǎn)是受人為操作因素影響小，純度的穩(wěn)定性很高 (雖然純度不一定比PC 純化方法更高)。加入的液體通過離心后會(huì)進(jìn)入另外一個(gè)離心管中，與含有核酸的柱子*是分開的，所以洗滌更*。其致命弱點(diǎn)是樣品過量，提取效率較低，且需要反復(fù)離心，操作復(fù)雜，成本也較高。
 

　　四、生物磁珠法
 

　　生物磁珠法是將純化介質(zhì)包被在納米級(jí)生物磁珠表面，通過介質(zhì)對核酸的吸附，在外加磁場下使核酸附著于磁珠定向移動(dòng)，從而達(dá)到固液分離純化的作用。與其他幾種方法相比，生物磁珠法具有很多的優(yōu)勢，如：
 

　?、偬崛§`敏度高(微量材料即可提取)
 

　?、诩兓兌雀?*與蛋白鹽等雜質(zhì)分離)
 

　　③提取產(chǎn)量高(每mg磁珠能吸附500ug DNA)