ELISA常見的組織樣本制備方法

　　為了保證ELISA實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在收集標本前都必須有一個完整的計劃。我們提倡新鮮樣品應(yīng)盡早檢測，對收集后一周內(nèi)檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆谩Ｈ缬刑厥庠蛐枰芷谛允占瘶颖?，在取材后講標本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差，蛋白容易降解，直接影響實驗質(zhì)量，故應(yīng)避免反復凍融。不同的樣本請根據(jù)實際情況處理。

　　樣品制備方法

　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

　　2.血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

　　3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

　　4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成分時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成分時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融.

　　7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。